細胞活力/毒性檢測試劑盒（CCK-8）

細胞活力/毒性檢測試劑盒（CCK-8）

細胞活力/毒性檢測試劑盒（CCK-8 試劑盒） 

產品簡介：CCK-8（Cell Counting Kit-8）試劑檢測細胞活力，可用于細胞增殖和毒性分析，方法簡便而準確。

其基本原理為：該試劑中的 WST-8 與 MTT 類似，在電子載體 1-甲氧基 PMS 的作用下，被細胞線粒體中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的橙黃色甲臜染料（Formazan），甲臜的生成量與活細胞的數量和活力成正比，因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。 

操作步驟：1、使用 96 孔板，細胞培養和處理完畢。2、每 100μl 細胞培養液加入 CCK-8 試劑 10μl。3、培養板放回培養箱，37℃孵育 1~4 小時。4、于 450nm 處測定 OD 值。5、結果分析將各測試孔的 OD 值減去對照孔或調零孔 OD 值。各平行孔的 OD 值取平均數。細胞活力％=（加藥細胞 OD-空白 OD）/(對照細胞 OD-空白 OD)×100％6、若使用 96 孔外的培養板，試劑用量等比例增減。

 注意事項：1、第一次使用時，建議先做幾個孔摸索條件，考察接種細胞的數量和加入 CCK-8 試劑后的培養時間。2、加入試劑速度要快，以避免試劑殘留和加樣速度不一所致反應時間不同造成的顯色誤差。有條件的情況下，建議采用多通道移液器，可以減少平行孔間的差異。為避免槍頭上的殘留所帶來的加樣誤差，CCK-8 試劑可在加樣前用培養基稀釋混勻。3、試劑加入后輕輕振搖培養板，使 CCK-8 試劑與培養基充分混勻。4、試劑加入后培養時間根據細胞種類的不同和每孔細胞數量的多少而異。對于貼壁細胞，加入 CCK-8 的培養時間一般為 1~4 小時，但在培養 30 分鐘左右即可取出肉眼觀察顯色程度（根據細胞種類而定）。與貼壁細胞相比，懸浮細胞較難顯色。對于懸浮細胞，在加入 CCK-8 培養 1~4 小時后，可先從培養箱中取出，目測染色程度或用酶標儀測定決定。白細胞較難顯色，因此需要較長的 CCK-8 反應時間或增加細胞數量（~105 個細胞/孔）。若顯色困難，可以將培養板放回培養箱，繼續培養數小時后再確定；注意：CCK-8 的最佳反應時間以具體顯色的最佳時間為準。5、CCK-8 試劑中的 WST-8 會與還原劑反應生成 WST-8 甲臜，如果實驗中有還原劑，需要檢查背景的 OD 值，即在不含細胞的培養基中加入藥物，然后加入 CCK-8 試劑在一定時間內檢測，和不加藥物的培養基進行比較（只加 CCK-8試劑），如果 OD 值明顯偏高，則說明有反應。6、若細胞培養時間較長導致培養基顏色或 pH 發生變化，建議更換新鮮培養基后再加入 CCK-8 試劑。含有酚紅的培養基不影響本試劑使用。7、如果樣品為高渾濁度的細胞懸液，建議設定 600nm（或 600nm 以上）作為參比波長，扣除參比波長的 OD 值即可。8、如果要測定細胞的具體數量，需要先做一個標準曲線。9、若測得 OD 值過高，可酌減鋪板細胞數或 CCK-8 試劑用量。 

試劑的優點：1、結果準確，重現性好 試劑不影響細胞活力，顯色產物直接溶解于培養液，直接測定 OD 值即可， 可準確反應細胞活力。2、操作省時簡單 試劑即開即用，無需配制；只需一步操作，即可測定。3、安全性好 不含放射性同位素和有害有機溶劑，使用安全。4、靈敏度高 靈敏度高于 MTT、XTT 和 MTS 等方法。 

貯藏條件：在避光 0-5℃的條件下存放一年，測定效果完全不變。在-20℃的條件下可以貯存更久。反復凍融會增加背景值，經常使用時請于 0~5℃條件下保存。本產品僅供科研使用，不做其它用途。

細胞活力/毒性檢測試劑盒（CCK-8）