固定液作用是殺死細胞,固定細胞形態。下面列舉幾種常用固定液及優缺點比較。
1. 冷丙酮 可用于一般的免疫組化染色。
將純的丙酮預先放入冰箱-20℃后便為冷丙酮(放心,丙酮在此溫度不會為固體的)細胞爬片取出后,PBS洗2遍,便可加入冷丙酮于-20℃(丙酮有很強的揮發性,注意將含有丙酮和爬片的器皿蓋嚴,防止其揮發)固定10分鐘。取出后,室溫吹干,然后放入-20℃保存。
2. 多聚甲醛(常用4%):可用于免疫電鏡;也可用于免疫熒光以及TUNEL染色。
主要檢測組織內一些性能嬌弱的抗原特別是細胞表面抗原,例如各類淋巴細胸分化決定簇(CD)、主要組織相容性抗原等
室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存
3. 95%乙醇,可用于免疫組化。
優點:穿透性強、抗原性保存較好。
缺點:但醇類對低分子蛋白質、多肽及胞漿內蛋白質保存效果較差,使蛋白變性的作用輕,固定后可再溶解;染色過程中,溫育時間長,抗原可流失而減弱反應強度
室溫固定15分鐘后,將表面液體吹干,入-20℃保存
4. 甲醛(福爾馬林)應用最廣
優點:形態結構保存好,且穿透性強,
缺點: 甲醛放置過久可氧化為甲酸,使溶液pH降低,影響染色; 分子間交聯形成的網格結構可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露??稍斐杉訇幮缘娜旧Y果。