DAPI染色DNA的原理及DAPI使用方法講解

　　DAPI染色DNA的原理及DAPI使用方法：
 

　　DAPI即4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-diamidino-2-phenylindole)，分子式為C16 H15 N5 ·2C3 H6 O3 ，分子量457.48。DAPI 為一種熒光染料，可以穿透細胞膜與細胞核中的雙鏈DNA結合而發揮標記的作用，可以產生比DAPI自身強20多倍的熒光，和EB相比，對雙鏈DNA的染色靈敏度要高很多倍。顯微鏡下可以看到顯藍色熒光的細胞，熒光顯微鏡觀察細胞標記的效率高(幾乎為100 %) 。DAPI染色常用于細胞凋亡檢測，染色后用熒光顯微鏡觀察或流式細胞儀檢測。DAPI也常用于普通的細胞核染色以及某些特定情況下的雙鏈DNA染色。細胞經熱激處理后用DAPI染色3分鐘，在熒光顯微鏡下可以看到到細胞核的形態變化。
 

　　DAPI是一種能夠與DNA強力結合的熒光染料。它結合到雙鏈DNA小溝的AT堿基對處，一個DAPI分子可以占據三個堿基對的位置。結合到雙鏈DNA上DAPI分子的熒光強度提高大約20倍，常用與熒光顯微鏡觀測，根據熒光的強度可以確定DNA的量。另外，因為DAPI可以透過完整的細胞膜，它可以用于活細胞和固定細胞的染色。在熒光顯微鏡觀察下，DAPI染劑是利用紫外光波長的光線激發。單獨DAPI的最大吸收波長為340nm，最大發射波長為488nm;當DAPI與雙鏈DNA結合時，最大吸收波長為364nm，最大發射波長為454nm(10 mM Tris pH7.0，100 mM NaCl，10 mM EDTA)，其發散光的波長范圍含蓋了藍色至青綠色。DAPI也可以和RNA結合，但產生的熒光強度只有與DNA結合的熒光強度的1/5，其發散光的波長范圍約在500nm左右。